Comment réussir un test PCR en gynécologie. Méthode PCR en gynécologie. Diagnostic PCR des infections intra-utérines. Le danger d'infection intra-utérine et les moyens de l'éliminer

En gynécologie, afin de réaliser certaines études, une grande variété de méthodes sont utilisées, dont l'une est un frottis PCR (PCR - polymerase chain reaction). Un frottis est une méthode de test par laquelle le médecin prend un grand nombre de matériel biologique de la surface de la muqueuse. Cette méthode permet de détecter diverses infections dans le corps, qui au début ne se signalent en aucune façon.

Comment comprendre les résultats de l'étude ?

La tuberculose génitale est l'une des principales causes maladie grave trompes conduisant à l'infertilité. Les valeurs de laboratoire ordinaires n'ont pas de grande importance dans le diagnostic. Un diagnostic absolu ne peut être établi à partir de traits caractéristiques hystérosalpingographie ou laparoscopie.

Cette étude a inclus 72 femmes infertiles qui répondaient aux critères d'inclusion et d'exclusion. Des tests diagnostiques spécifiques ont été évalués par rapport à ce critère diagnostique. La concordance des résultats entre les critères cliniques et les tests diagnostiques spécifiques a été analysée selon la convention de Kappa.

Ce type d'analyse est effectué dans le canal cervical ou la muqueuse vaginale. Un frottis PCR peut détecter des agents infectieux ou des maladies sur la base de leur matériel génétique ADN.

Comment se déroule l'analyse PCR ?

Un frottis étamé est placé dans un réacteur spécial, certaines parties de l'ADN de l'agent infectieux peuvent être présentes dans ce matériel biologique. Des enzymes spéciales sont ajoutées à l'échantillon prélevé, capables de se lier à l'ADN du micro-organisme et de renouveler également sa copie. Cette réaction se déroule selon le principe de la chaîne et après plusieurs cycles de sa répétition, un nombre suffisant de copies est formé qui peut être comparé aux informations disponibles dans la base de données sur l'ADN des micro-organismes. Un frottis PCR prélevé sur des femmes permet également d'établir le nombre de microbes présents dans le corps d'une femme.

Comment passer des tests

La tuberculose est une maladie infectieuse chronique et la morbidité associée à cette maladie a de graves conséquences sur la santé. La maladie est répandue dans le monde entier et Pays en voie de développement l'incidence est élevée. La maladie reste souvent silencieuse ou peut présenter des symptômes non spécifiques. En conséquence, la prévalence de la tuberculose génitale est largement sous-estimée.

La forte suspicion causée par des investigations intensives est essentielle pour le diagnostic de la maladie. Les valeurs de laboratoire ordinaires ont peu de valeur. Bien qu'un diagnostic absolu ne puisse être établi à partir des caractéristiques d'une hystérosalpingographie ou d'une laparoscopie, la laparoscopie est une procédure précieuse pour obtenir des tissus pour la culture et l'examen histopathologique.

Cette technique permet de sélectionner avec précision une méthode de traitement, ainsi que de suivre son efficacité.

Quelles infections peuvent être détectées par un frottis PCR ?

Un grand nombre d'agents infectieux peuvent être présents dans le corps, y compris ceux "cachés" qui longue durée ils ne se montrent pas.

L'analyse des frottis PCR révèle les infections suivantes :

Comment se déroule l'analyse PCR ?

Un diagnostic définitif peut être posé par une culture positive de mycobactéries et par la mise en évidence d'une lésion histopathologique spécifique sur un échantillon. À dernières années La méthode de réaction en chaîne par polymérase est devenue une méthode utile et rapide pour diagnostiquer la tuberculose pulmonaire et extrapulmonaire.

Cette étude a été menée au Centre de recherche sur la fertilité de l'Institut d'obstétrique et de gynécologie de Chennai en collaboration avec le Centre de recherche sur la tuberculose de Chennai et a inclus 72 femmes infertiles qui ont été inscrites pendant 30 mois. L'approbation du comité d'éthique a été obtenue pour l'étude et le consentement éclairé a été obtenu de chaque patient.

  • chlamydia du tractus génital;
  • hépatite;
  • ureplasmose des organes génitaux;
  • candidose (muguet);
  • mycoplasmose;
  • vaginose bactérienne;
  • Mononucléose infectieuse;
  • trichomonase;
  • infection virale à papillome;
  • herpès;
  • SIDA (VIH);
  • la présence de cellules cancéreuses;
  • évaluer l'état hormonal;

Comment un écouvillon est-il prélevé chez les femmes?

Afin de prélever un frottis pour PCR, divers matériaux biologiques sont utilisés (il peut s'agir de sang, de salive, de sécrétions des organes génitaux, d'urine). En laboratoire, un écouvillon est prélevé sur les femmes de la microflore vaginale, du col de l'utérus ou de l'utérus. L'écouvillon est prélevé :

L'échantillonnage a été effectué par la méthode d'échantillonnage pratique. Au cours de la laparoscopie, il y avait des signes évocateurs de tuberculose, tels que des tubercules francs, des caséines, des granulomes et des tubes perlés. Les preuves d'une infection chronique passée sous la forme de trompes épaissies, de caséinisation intraluminale et d'hydrosalpinx terminal avec répliques de trompes, de masse tubo-ovarienne et de fausses adhérences dans la poche de Douglas ont également été examinées.

Le matériel pour l'étude a été collecté à partir de l'endomètre prémenstruel et, si possible, le sac de liquide de Douglas a également été aspiré lors de la laparoscopie. Dans 23 des 72 cas, seuls le frottis, la culture et l'examen histopathologique ont été possibles. Par conséquent, les résultats des tests spécifiques ont été évalués selon des critères cliniques uniquement dans ces 49 cas.

  • chez les femmes ayant eu des rapports sexuels non protégés,
  • qui n'ont jamais été examinés
  • chez les femmes qui envisagent de devenir enceintes.

Les indications d'un frottis PCR sont les suivantes :

  • identifier les causes de l'infertilité;
  • la présence d'IST en phase aiguë ;
  • grossesse difficile;
  • l'hypothèse que les IST deviennent chroniques ;
  • dans le cas où il est nécessaire d'identifier la résistance du virus à un certain type d'antibiotiques.

Les réactifs nécessaires sont ajoutés au matériel prélevé, après quoi les agents pathogènes ou la maladie sont identifiés. La procédure de prise du matériel ne dure pas plus de 5 minutes, elle est absolument indolore et son résultat peut être découvert après 2-4 jours. Selon ses résultats, un traitement est prescrit.

Comment un écouvillon est-il prélevé chez les femmes?

La présence de granulomes de caséine entourés de cellules épithélioïdes, de lymphocytes, de plasmocytes et de cellules géantes était un diagnostic de tuberculose. Pour la culture, l'échantillon de tissu a été finement haché avec 5 ml d'eau distillée stérile. L'échantillon a été centrifugé et le surnageant a été jeté.

Méthode de réaction en chaîne par polymérase. Les patients étaient âgés de 20 à 35 ans. Irrégularités menstruelles telles que l'aménorrhée secondaire, l'oligoménorrhée et la ménorragie ont été observées dans 18 cas. Dans 42 cas, à part l'infertilité, il n'y avait pas d'autres symptômes. Trois des 72 cas avaient des antécédents de contacts étroits avec des patients tuberculeux. Un test tuberculinique positif a été observé dans 10 cas avec une valeur moyenne de 13 mm. Dans ces 10 cas, il y avait des signes de tuberculose dans neuf cas.

Que doit savoir une femme avant de passer un frottis PCR ?

Avant de mener l'étude, une femme doit se préparer. Déjà un mois avant l'analyse prévue, il faut arrêter d'utiliser tous médicaments et procédures médicales.

Il convient de noter que l'analyse est effectuée avant la menstruation ou 1 à 4 jours après sa fin. Pendant 3-4 jours avant l'analyse, il est nécessaire de s'abstenir de relations intimes. Habituellement, les matériaux sont prélevés dans les situations où le virus entre dans la phase aiguë.

Des signes de calcification par échographie ou radiographie de l'abdomen ont été observés chez cinq femmes. Une hystérosalpingographie a été réalisée dans 59 cas. Les caractéristiques indiquant une tuberculose génitale, telle qu'une cavité endométriale déformée, perlée apparence des trompes, un hydrosalpinx en forme de cornue, des zones calcifiées et des blocs de maïs ont été observés chez 35. La laparoscopie a été réalisée chez les 72 patients et les résultats ont suggéré une tuberculose chez 43.

À l'examen histopathologique, cinq des 72 échantillons d'endomètre étaient positifs pour la tuberculose. Parmi ceux-ci, cinq étaient positifs par les méthodes conventionnelles, un était positif à la culture uniquement, deux étaient positifs à l'histologie uniquement et seuls deux patients étaient à la fois positifs à l'histologie et à la culture.

Particularités de l'analyse PCR :

  • grande précision de détermination du type d'infection;
  • pour identifier l'agent pathogène, même 1 de ses cellules suffit;
  • la capacité d'identifier l'agent pathogène dans n'importe quel milieu liquide ;
  • vitesse suffisamment élevée de détermination des résultats;
  • permet d'identifier le virus, et non ses déchets ou anticorps ;
  • une méthode qui détecte avec précision certains types d'infections.

En comparaison avec d'autres méthodes de recherche, cette technique donne beaucoup moins de faux résultats négatifs (montre qu'il n'y a pas d'infection, alors qu'elle est réellement présente), et avec une précision de 99,9% ne donne pas de faux - résultats positifs(présence d'infection quand elle n'est pas présente)

Sur la base des critères diagnostiques développés dans cette étude, 49 cas ont été divisés en deux groupes et des tests diagnostiques ont été évalués. Le groupe A comprenait 28 cas chez lesquels une tuberculose génitale était suspectée. Dans le groupe A, deux étaient positifs à la culture. La sensibilité de la culture était de 14 % et la spécificité était de 100 %. Il y avait accord entre les critères cliniques et la culture en termes d'accord Kappa. Dans ces deux cas, les échantillons ont été retestés et la positivité a été confirmée.

Comment comprendre les résultats de l'étude ?

Un frottis PCR peut être négatif ou positif.

Un résultat positif indique qu'il y a des traces d'infection dans le matériel biologique collecté, et lesquelles ont été téléchargées.

Un résultat négatif a le sens opposé et signifie qu'au cours de l'étude, aucune trace d'infection n'a été trouvée dans le matériel.

5 des 12 échantillons négatifs ont été retestés et tous se sont révélés négatifs. Le rééchantillonnage n'est possible que dans trois cas, et tous ont été marqués comme négatifs. Dans 3% des cas, en dehors de l'infertilité, il n'y avait pas d'autres symptômes. Des observations similaires ont été faites par d'autres auteurs.

Des troubles menstruels tels que l'aménorrhée secondaire, l'oligoménorrhée et la ménorragie ont été observés dans 25% des cas. Mais en raison de la nature secondaire de la tuberculose génitale, les organismes infectieux sont peu nombreux, le site de prélèvement peut ne pas représenter une zone infectée et un site infecté peut facilement passer inaperçu. Dans 50% des cas, l'infection peut se limiter à la trompe de Fallope. De plus, en raison de la prolifération cyclique de l'endomètre, les granulomes n'ont pas assez de temps pour se former, de sorte que l'endomètre peut ne pas montrer de signes de tuberculose à tous les cycles.

Frottis PCR et grossesse

S'il arrivait que cette espèce une analyse femme enceinte il n'était pas nécessaire de le prendre, alors il est déjà prélevé sur une femme enceinte, car cette étude aide à identifier les infections cachées pouvant être transmises sexuellement, ainsi que d'autres infections cachées qui ne se manifestent pas pendant longtemps. Ils peuvent vraiment nuire au bébé ou entraîner une fausse couche, des infections intra-utérines ou une naissance prématurée. C'est pourquoi il est préférable de faire cette analyse avant la grossesse, lors de sa planification, afin de ne pas nuire au bébé. Mais s'il s'avère que la femme est déjà enceinte, vous ne devriez pas avoir peur de faire le test, car cela n'affecte pas le bébé. Tous les matériaux sont prélevés à la surface du col de l'utérus ou du canal cervical.

L'échantillon de biopsie peut être petit et le flux sanguin peut être médiocre. Pour ces raisons, plusieurs spécimens doivent être récoltés à partir de plusieurs sources pour assurer un rendement maximal. Il a été suggéré que l'histologie et la bactériologie sont complémentaires et qu'aucune n'est totalement fiable. Ainsi, un accord a été atteint entre les résultats des deux amorces dans 71% des cas.

Le danger d'infection intra-utérine et les moyens de l'éliminer

Le taux élevé de faux négatifs est une limite importante dans cette étude. Les principes de médecine interne de Harrison. 17e éd. Aspects anatomiques et cliniques modernes de la tuberculose génitale chez la femme. Tuberculose génitale féminine et infertilité subséquente. Tuberculose génitale féminine en Ethiopie. Tuberculose de l'appareil génital féminin chez les patients fréquentant une clinique d'infertilité.

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Le frottis PCR chez la femme, qu'est-ce que c'est, pourquoi le prend-on et selon quelles règles ? Cette étude vous permet d'identifier très précisément les agents responsables de diverses infections et les coupables. processus inflammatoires(vulvovaginite). Une analyse PCR est effectuée sur ceux qui sont sexuellement actifs et n'ont jamais été examinés, planifient une grossesse, qui ont eu des rapports sexuels non protégés, les femmes et les hommes donnent un frottis.

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Cependant, ce rapport n'a vérifié que termes limités environnement. L'utilisation d'une pointe de pipette à barrière contre les aérosols est nécessaire pour éviter la contamination croisée ainsi que la contamination par transfert. Par conséquent, la manipulation de ces précipités peut nécessiter des conjectures, en particulier lors du lavage des précipités. Certains kits d'extraction et de purification disponibles dans le commerce basés sur le protocole de purification en phase solide sont répertoriés dans le tableau 1.

La réaction en chaîne par polymérase, c'est ainsi que se décrypte la PCR, permet de retrouver l'information génétique d'un agent infectieux dans une petite quantité de matériel prélevé pour analyse. Le plus courant est un frottis PCR pour les IST (chlamydia, ureaplasma, mycoplasma), d'ailleurs, ces mêmes infections sont classées comme "cachées" qui ne donnent pas de symptômes évidents et ne sont pas détectées lors d'études de routine ordinaires. Les infections herpétiques sont souvent diagnostiquées, ainsi que divers types d'infection par le papillomavirus humain. Où Attention particulière est administré aux types qui causent le cancer du col de l'utérus, c'est-à-dire oncogènes.

Ces kits éliminent non seulement les conjectures, mais également les étapes fastidieuses d'extraction du phénol-chloroforme. Ceci est généralement interprété comme un ou les deux amplimères oligonucléotidiques ne fonctionnant pas correctement avec la matrice cible. Ce protocole de détection offre également une sensibilité plus élevée que la méthode de détection au bromure d'éthidium, mais nécessite des étapes supplémentaires de transfert et d'hybridation. Il existe deux types d'analyses utilisant des lectures et des points finaux en temps réel. Cette méthode sans gel présente plusieurs autres avantages par rapport aux méthodes conventionnelles sur gel d'agarose.

Un frottis PCR pour la chlamydia et d'autres infections est prélevé chez les femmes enceintes si elles ne l'ont pas fait lors de la planification de l'enfant. Cette étude est absolument nécessaire, car les infections sexuellement transmissibles latentes peuvent «s'asseoir» dans le corps pendant de nombreuses années, sans se montrer d'aucune façon, mais elles nuiront grandement à l'enfant à naître, peuvent entraîner une fausse couche, une naissance prématurée et, par conséquent , mort fœtale. Bien sûr, il est préférable d'effectuer un traitement au stade de la planification d'un enfant, mais si le diagnostic PCR des infections les détecte après la conception, cela n'a pas d'importance, il existe des médicaments modernes et sûrs que les futures mères peuvent prendre.

Que montre l'analyse PCR ?

Par exemple, ce système peut augmenter considérablement le débit. L'analyse par sonde fluorescente est effectuée dans un format à 96 puits et de nombreuses étapes d'analyse sont automatisées. Le test est un système fermé dans lequel le tube de réaction n'est jamais ouvert après l'amplification.

Il a été montré séro-épidémiologiquement que 50 à 80% de la population adulte est exposée à ce pathogène. Cependant, il n'y avait pas de résultats cohérents avec des agents pathogènes spécifiques. Par conséquent, il est impossible d'évaluer si le protocole utilisé est suffisamment sensible ou non en raison du manque d'informations dans ces rapports.

Beaucoup de femmes ont peur de passer des tests, en ayant entendu et lu suffisamment pour que toute manipulation "là" par un médecin puisse le faire. Et plus encore, vous ne pouvez pas faire de frottis PCR pendant la grossesse, car le matériel est prélevé sur le col de l'utérus et non sur sa surface. Mais ce n'est pas effrayant. La longueur du col est assez grande. L'outil n'entrera pas dans l'utérus, n'affectera en rien l'enfant. Et il n'est pas nécessaire d'élargir le col pour prélever le biomatériau. sans danger pour la mère et l'enfant et sans douleur.

Certaines maladies inflammatoires chroniques, qui ne sont pas encore définitivement classées comme maladies auto-immunes, sont également considérées comme associées à certaines infections microbiennes. Cependant, contrairement aux maladies infectieuses, les microbes potentiels ou contribuant à ces maladies chroniques maladies inflammatoires, y compris les maladies auto-immunes, ne peuvent pas être facilement détectées dans des échantillons prélevés sur une lésion particulière. Même dans de telles circonstances, la détection cohérente des bactéries dans les échantillons devrait être essentielle pour le diagnostic et la thérapie future.

Cette étude est menée non seulement pour détecter les infections sexuellement transmissibles, mais également les agents responsables de la vaginose bactérienne et de la candidose - gardnerella et champignons du genre Candida. Ainsi, le déchiffrement d'un frottis pour le diagnostic PCR peut être utile dans de tels cas "banals".

Afin d'obtenir un résultat d'analyse précis, plusieurs règles simples avant de le remettre. La préparation d'un frottis PCR est très simple.
1. Vous ne pouvez pas uriner 3 heures avant le test.
2. L'étude est menée en dehors de l'utilisation d'antibiotiques et d'agents antibactériens.
3. Il est préférable de faire un frottis au milieu du cycle, mais pas juste avant le début de la menstruation ou immédiatement après la fin.
4. 2-3 jours avant l'étude, n'utilisez pas de contraceptifs locaux ni de préparations vaginales.
5. Pendant plusieurs heures avant le frottis, vous ne pouvez pas vous laver et vous doucher.
6. vie sexuelle doit être arrêté au moins 1,5 jours avant de prendre le matériel.
7. La livraison d'un frottis doit être légèrement différée si des échantillons colposcopiques ont été prélevés la veille pour détecter des maladies du col de l'utérus.

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